紫甘蓝又名赤甘蓝、双水色素红甘蓝，相系属于十字花科，统萃芸薹属甘蓝种的取纯一个变种。十字花科植物之中含有较为丰硕的化紫多酚类物资，紫甘蓝中的甘蓝多酚类化合物次若是花青素，花青素在植物体内主要以糖苷的双水色素方式存在，紫甘蓝中的相系花着苷类化合物主要为矢车菊色素的糖苷。花青素具备抗氧化、统萃抗癌以及降血糖等心理活性，取纯同时紫甘蓝花青素在酸性到中性规模内可能实现颜色由红到紫的化紫转变，可能普遍运用于糖果、甘蓝饮料等食物破费之中，双水色素因此将紫甘蓝花青素开拓成为食物削减剂具备很高的相系社会效益以及经济效益。

双水相萃取是统萃一种新型的物资分说技术，与传统分说措施比照，具备条件以及善、产物活性损失小、分说步骤少、无有机溶剂残留、操作重大等短处，国内外普遍运用于卵白质的纯化以及抗生素的提取，近些年来逐渐运用于做作色素的分说纯化钻研，国内对于运用双水相萃取纯化紫甘蓝色素的钻研相对于较少，外洋有相关的报道，但并未对于其萃取条件妨碍优化。

紫甘蓝色素破费时，粗提液中含有大批的糖类杂质，极大地影响了色素的品质以及晃动性。传统工业对于植物花青素的提取主要接管酸水浸提法、溶剂法，尚有超声波法。花着苷溶液中含有大批的单糖、二元糖、低聚糖以及多糖等杂质。当初，柱色谱、高速顺流色谱以及大孔吸附树脂普遍运用于花青素的分说、纯化，可能实现色素与其糖类物资的分说，但与双水相萃取比照，老本较高、光阴较长、对于操作要求严厉。因此运用双水相萃取的措施实现植物花青素与其糖类杂质的分说属于一种新型、快捷、低老本的操作方式。本钻研试验运用双水相萃取技术，将紫甘蓝色素与糖类物资分说，经由抉择性系数表征此措施的实用性。

一、质料以及措施

一、试验仪器

pH211酸度计；TDL-60B低速大容量离神思；HY-6双层振荡器；752S紫外可见分光光度计；AR1530合终日平。

二、试验质料

紫甘蓝；PEG6000配制成400g／L；苯酚为优级纯；其余试剂均为合成纯。

三、合成措施

（1）紫甘蓝色素属于花着苷类，凭证美国化学工程师协会（AOAC）对于花青素类做作色素中花着苷总量的措施妨碍测定，以矢车菊-3-葡萄糖苷计。

式中：

吸光度A=（A₅₂₀-A₇₀₀）_pH1.0-（A₅₂₀-A₇₀₀）_pH4.5

M：矢车菊-3-葡萄糖苷的摩尔品质，449.2g／mol；

D：样品蕴藏液的稀释倍数；

1：光路长，cm，测试中接管1cm光路长的比色皿；

ε：26900，矢车菊-3-葡萄糖苷的摩尔消光系数，L·mol^-1·cm^-1；

1000：由g换算成mg的转换系数。

（2）运用苯酚-硫酸法对于高下相中总糖含量妨碍测定。

（3）抉择性系数k的合计。

式中：

K_花：花青素的调配系数；

K_糖：多糖的调配系数；

C_上花：上相中花青素的品质浓度，mg／L；

C_下花：下相中花青素的品质浓度，mg／L；

C_上糖：上相中糖类物资的品质浓度，mg／mL；

C_下糖：下相中糖类物资的品质浓度，mg／mL。

四、试验措施

（1）紫甘蓝色素粗提液制备

取过多紫甘蓝洗净、切碎，运用榨汁机压迫原汁，100目滤布过滤，3000r／min离心15min，取下层清夜冷藏保存，运用前调pH。

（2）双水相系统建树

牢靠系统品质为30.0g。在50mL离心管中分说退出确定品质的硫酸铵以及PEG6000原液，退出确定品质预先调过pH的色素粗提液，加水补至系统品质为30.0g，置于振荡器上300r／min于室温下震撼10min后取下，读取高下相体积，用移液管分说移取高下相溶液于30mL比色管中。

（3）花着苷含量的测定

详尽罗致高下相溶液，分说用pH=1.0的氯化钾缓冲溶液以及pH=4.5醋酸钠缓冲溶液稀释适量倍数，以蒸馏水做空缺，分说在520nm以及700nm下测吸光值。合计高下相中花着苷含量，而合计出K_花。在700nm波长下测定吸光度值是为了校对于混浊对于测定服从的干扰。

（4）多糖含量的测定

以葡萄糖为比力，接管苯酚-硫酸法测定多糖的含量。回归方程为：y=8.1114x-0.0069，R²=0.9983。分说详尽罗致高下相样品稀释液1.0mL于试管中，退出5%的苯酚溶液1.0mL，快捷退出浓硫酸溶液5.0mL，摇匀，部署10min后于40℃水浴加热10min，掏出后冷水浴5min，以响应试剂为空缺，在490nm处测定吸光度，合计患上到K_糖。

（5）正交试验妄想

由于各因素（即硫酸铵品质分数、PEG的品质分数、系统pH、粗提液品质分数）之间有相互协同熏染，如表1所示，妨碍正交试验并合成，图1中硫酸铵的浓度在最高值18%时，抉择性系数最大，因此正交试验妄想硫酸铵浓度不断增高，为18%、19%、20%三个水平。

二、服从与品评辩说

一、单因素试验

（1）硫酸铵的品质分数对于抉择性系数k的影响在50mL离心管中退出15.0gPEG6000原液，4.2g色素粗提液，分说退出3.0g、3.6g、4.2g、4.8g、5.4g硫酸铵，调节系统pH为5，双水相萃取服从如图1所示。

由图1可知，随着硫酸铵品质分数的削减，抉择性系数k呈回升趋向，抉择性系数在硫酸铵品质分数为18%时抵达最高。随着硫酸铵品质分数的削减，增强了高下两相物资的分相，后退了上相中花青素的浓度，同时后退了糖类杂质不才相的含量，削减了对于色素的纯化水平。

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